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脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)检测原理是在酸性条件下，伊红解离成阴离子型，染料瞌颜色逐渐褪去，使试剂空白吸光度降低；蛋白质多肽中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸、色氨酸残基解离成带有-NH3+基团，与伊红结合成红色蛋白复合物，其吸光度与蛋白浓度呈比例，与同样处理的标准液比较，测得样本中蛋白质的含量，可用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定。

• 蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
  
• 如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定，使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
  
• 相同浓度的蛋白质，白蛋白呈色稍强，球蛋白稍低。
  
• 本方法线性范围可达1000mg/L，若CSF中蛋白含量过高，常规检查时潘氏实验达(2+)者，测定时CSF用量应适量减少，计算时应相应修正。
  
• 本方法加入试剂后1～5min内呈进行性缓慢下降，10～30min趋于平稳，可稳定1~2h。
  
• TP Acidic Buffer加入量应准确，边加边混匀，否则影响结果。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 取1mL蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成20mg/mL的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。取适量20mg/mL的蛋白标准溶液用蛋白标准配制液或稀释液继续进行稀释至0.7mg/mL。
  
  • 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中，一般也可以用0.9% NaCl或PBS作为稀释液。
• TP加样：按照下表设置系列孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
  蛋白标准配制液	4	-	-
  蛋白标准溶液(0.7mg/mL)	-	4	-
  待检样品(脑脊液)	-	-	4
  TP Acidic Buffer	8	8	8
  TP显色液	240	240	240

• TP测定：混匀，室温孵育10min，酶标仪测定540nm处的吸光度，以空白孔调零，读取标准孔、测定孔的吸光度(即为A _标准和A _测定)。